Campus Moncloa

EQUIMDIET

Estrategias Quimiopreventivas frente a Compuestos Carcinogénicos de la Dieta

Facultad de Veterinaria
Universidad Complutense de Madrid

Nuestro Grupo de investigación tiene una amplia experiencia en Seguridad Alimentaria. Durante los últimos 20 años hemos desarrollado y puesto a punto numerosos métodos de toxicidad y genotoxicidad in vitro para detectar la presencia de compuestos tóxicos, mutagénicos y/o carcinogénicos, en los alimentos, utilizando para ello cultivos celulares de animales y humanos. La Metodología que realizamos en nuestro laboratorio es la siguiente:

A. Ensayos de Citotoxicidad y Mecanismos de Acción:

1. Evaluación de la Viabilidad Celular: Se utilizan algunos marcadores de citotoxicidad como son: la actividad mitocondrial (actividad de la enzima succinato mitocondrial, Método MTT), la permeabilidad de la membrana (liberación de la lactato-deshidrogenasa, Método LDH), la pérdida de potencial de membrana mitocondrial (??m), el metabolismo energético (contenido en ATP), y determinación del glutation (GSH), de la superoxidodismutasa (SOD) y de la catalasa como enzimas antioxidantes.

2. Inducción de Apoptosis: Se utilizan diferentes métodos como: Microscopía de fluorescencia (Tinción con Hoechst 33342 y con Naranja de Acridina), Citometría de flujo (Contenido de ADN, Anexina, TUNEL, Actividad de Caspasas, Determinación de Proteínas Intracelulares Bax y Bcl-2, especies reactivas del oxígeno, EROs), Western Blot (citocromo c y PARP).

B. Ensayos de Genotoxicidad:

1. Determinación del daño al DNA: Inducción de la ruptura de las cadenas del DNA, del daño oxidativo: oxidación de purinas y pirimidinas y del daño alquilativo (Ensayo Cometa).

2. Ensayos de Mutagenicidad: utilizando bacterias (Test de Ames) y líneas celulares (Ensayo de Mutación Génica).

C. Ensayos Inmunoenzimáticos ELISA: Se utilizan distintos formatos: ELISA Indirecto, Directo, Sándwich, Competitivo

D. Ensayos de determinación de la actividad enzimática del citocromo P450 (Fase I y II), utilizando microsomas humanos: medida de la actividad del citocromo CYP2E1, CYP2A6, CYP1A1 y UDP-glucuronil-transferasa, etc.

E. Ensayos de absorción intestinal (Caco2): Resistencia eléctrica transepitelial (TER) y permeabilidad aparente. Evaluación de la actividad transportadora.

• Líneas de acción del clúster de Agroalimentación y Salud

• Sanidad Animal y Seguridad Alimentaria
• Higiene y Tecnología de los Alimentos

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